COM

Yang Muda Berkarya

Sunday

Uji Kualitatif Dan Semikuantitatif ASTO Instruction Kit Manual Antistreptolysin-O - Darahpemuda.com

 



UJI KUALITATIF

 

 

Tingkat deteksi 200 IU / mL

 

1.  Biarkan reagen dan sampel mencapai suhu kamar (20 hingga 30 ° C).

2.  Kocok botol reagen secara perlahan untuk membubarkan dan menahan partikel lateks dalam larutan buffer. Gemetar yang kuat harus dihindari.

3.  Tempatkan 50 µL serum pada satu bagian kaca objek sekali pakai.

4.  Tempatkan satu tetes reagen di sebelah setetes serum.

5.  Campur kedua tetes dengan pengaduk yang menutupi seluruh permukaan bagian slide.

6.  Putar slide secara perlahan selama 2 menit secara manual atau pada pengocok putar yang disetel pada 80-100 rpm.

7.  Cari ada tidaknya aglutinasi setelah jangka waktu yang disebutkan di atas.

 

 

Tingkat deteksi 100 IU / mL


1.  Biarkan reagen dan sampel mencapai suhu kamar (20 hingga 30 ° C).

2.  Kocok botol reagen secara perlahan untuk membubarkan dan menahan partikel lateks dalam larutan buffer. Gemetar yang kuat harus dihindari.

3.  Tempatkan 100 µL serum pada satu bagian kaca objek sekali pakai.

4.  Tempatkan satu tetes reagen di sebelah setetes serum.

5.  Campur kedua tetes dengan pengaduk yang menutupi seluruh permukaan bagian slide.

6.  Putar slide secara perlahan selama 4 menit secara manual atau pada pengocok putar yang disetel pada 80-100 rpm.

7.  Cari ada tidaknya aglutinasi setelah jangka waktu yang disebutkan di atas.

 

 

Interpretasi hasil

 

 

Tingkat deteksi 200 IU / mL

 

Adanya aglutinasi menunjukkan kandungan antistreptolysin-O dalam serum sama dengan atau lebih besar dari 200 IU / mL.

Tidak adanya aglutinasi menunjukkan kandungan antistreptolysin-O dalam serum kurang dari 200 IU / mL.

 

 

Tingkat deteksi 100 IU / mL

 

Adanya aglutinasi menunjukkan kandungan antistreptolysin-O dalam serum sama dengan atau lebih besar dari 100 IU / mL.

Tidak adanya aglutinasi menunjukkan kandungan antistreptolysin-O dalam serum kurang dari 100 IU / mL.

 

 

REAKSI POSITIF:

 

3+ Penggumpalan besar dengan latar belakang yang jelas.

2+ Penggumpalan sedang dengan cairan agak buram di latar belakang.

1+ Gumpalan kecil dengan cairan buram di latar belakang.

 

 

 

REAKSI NEGATIF:

 

Tidak ada penggumpalan yang terlihat, suspensi seragam.

 

 


UJI SEMIKUANTITATIF

 

Biarkan reagen dan sampel mencapai suhu kamar (20 hingga 30 ° C). Persiapan pengenceran serial dua kali lipat dari serum pada slide (lihat diagram deskriptif untuk tekniknya):

 

1.  Tempatkan 50 µL saline normal pada slide bagian 2 sampai 6.

 

2.  Dengan menggunakan pipet otomatis, tempatkan 50 µL serum ke slide bagian 1 dan 50 µL langsung ke dalam tetesan saline normal pada slide bagian 2.

 

3.  Menggunakan pipet yang sama, ambil dan lepaskan beberapa kali campuran yang dibuat pada bagian 2 dan pindahkan 50 µL campuran ke bagian 3. Ulangi cara ini secara serial sampai bagian 6, buang 50 µL dari bagian 6.

 

Section

  1      2       3       4       5       6

Saline µL

   -     50     50     50     50     50

Serum µL

  50    50       -        -        -        -

Mix and transfer µL

                   

 

       50              50              50    

 

 

      50             50

Dilution

  1:1 1:2    1:4    1:8    1:16 1:32

IU/mL

  200 400   800   1600 3200 6400

 

4.  Kocok botol reagen dengan lembut dan tambahkan satu tetes reagen ke setiap bagian.

Campur kedua tetes menggunakan pengaduk yang menutupi seluruh permukaan bagian slide.

 

5.  Putar slide secara perlahan selama 2 menit secara manual atau pada pengocok putar yang disetel pada 80-100 rpm.

 

6.  Cari ada tidaknya aglutinasi setelah jangka waktu yang disebutkan di atas.

 

 

Interpretasi hasil

 

Perkiraan titer akan sesuai dengan pengenceran serum tertinggi yang masih menunjukkan aglutinasi yang terlihat jelas (lihat diagram).

 

 

 

 

 

 

 

Keterbatasan prosedur

1.  Pembacaan hasil setelah lebih dari 2 menit (4 menit pada tingkat deteksi 100 IU / mL) dapat memberikan hasil positif palsu.

 

2.  Kekuatan aglutinasi tidak selalu menunjukkan konsentrasi antistreptolysin-O relatif. Ketika konsentrasi antistreptolysin-O melebihi 1500 IU / mL, (750 IU / mL dalam tingkat deteksi 100 IU / mL), reaksi lemah dapat terjadi karena kelebihan antibodi. Jika diduga konsentrasinya lebih tinggi dari 2000 IU / mL (1000 IU / mL dalam tingkat deteksi 100 IU / mL), sampel harus diuji diencerkan.

 

3. Titer antistreptolysin-O yang meningkat digunakan sebagai bantuan laboratorium dalam mendeteksi infeksi streptokokus grup A dan sekuelnya, demam rematik akut, dan glomerulonefritis pasca-streptokokus. Meskipun peningkatan titer antistreptolysin-O tercatat pada 80 hingga 85% pasien, diagnosis tidak boleh dikesampingkan karena hasil tes negatif.

 

 

Nilai yang diharapkan

 

Meskipun nilai normal dapat bervariasi dengan usia, musim tahun dan wilayah geografis, 2 titer antistreptolysin-O «batas atas normal» untuk anak-anak prasekolah adalah kurang dari 100 IU / mL, dan di usia sekolah anak-anak atau dewasa muda biasanya antara 166 dan 250 IU / mL.5 Bagaimanapun, rata-rata dapat ditetapkan pada kurang dari 200 IU / mL.

 

Karena variasi ini, titer di atas batas atas dapat menjadi indikasi infeksi streptokokus, tetapi hanya peningkatan titer pengenceran dua kali antara spesimen tahap akut dan tahap penyembuhan yang dianggap signifikan.2 Setelah infeksi streptokokus akut, titer antistreptolysin-O biasanya akan meningkat setelah satu minggu, meningkat ke tingkat maksimum dalam 3 sampai 5 minggu dan biasanya kembali ke tingkat sebelum infeksi dalam waktu kurang lebih 6 sampai 12 bulan.

 

 

Karakteristik kinerja

 

Sure-Vue® ASO dievaluasi (tingkat deteksi 200 IU / mL) dibandingkan dengan tes lateks yang tersedia secara komersial. Sebanyak 170 sampel dari pasien rumah sakit diuji mengikuti teknik kualitatif. Studi ini menunjukkan kesesuaian 95,9% antara tes (sensitivitas 96,7% dan spesifisitas 95,4%). Perbedaan diselesaikan dengan tes lateks lain yang tersedia secara komersial, dan sensitivitas yang diperoleh adalah 98,4% dan spesifisitas 98,1%, dengan persetujuan keseluruhan 98,2%

 

Tiga orang berbeda menguji pengenceran ganda sampel kuat pada lima hari berbeda, dua kali setiap hari. Hasil penelitian menunjukkan bahwa reproduktifitas in-house Sure-Vue® ASO (dalam satu pengenceran) adalah 100%.

 

No comments:

Post a Comment